KYY127-0.5

科研云 转染试剂 操作手册

1. 产品规格

货号	名称	规格	应用
KYY 127- 0.5	KYY -R Transfection Rea gent	0 .5ml	siRNA/miRNA 专用转染试剂

2. 产品描述

K YY-R 转染试剂是专门转染siRNA和miRNA的，是纳米粒子材料。与其它转染试剂相比，KYY-R转染试剂具有毒性低、稳定性好、转染简单易行、重复性好等优点。

3. 应用范围

KYY-R转染试剂适应于众多原代培养细胞和转化细胞株的转染，瞬时转染和稳定转染，可用于多种贴壁细胞以及悬浮细胞系，特别适用于各种常规细胞如 293，293T ，COS7 ，A549 ，hela 等细胞，均能得到较高的转染效率，且重复性好。

4 . K YY - R Transfection Reagent 是 RNA 专用型转染试剂，转染 siRNA 实验步骤如下：

siRNA 转染流程

下列步骤以 24 孔板为例，所有试剂用量和体积均是按每孔计算。

1.贴壁细胞：转染前一日，每孔 0.5-2.0×105 个细胞接种于 500 µL 含抗生素的培养基中，转染时细胞长至 60%~80%融合最佳。

2. 转染复合物的制备

A 将 K YY - R Transfection Reagent 转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀;

B 在无菌管中加入 50 ul 无血清培养基或 OPTI-MEM ，并添加 2ul 转染试剂，用移液器轻轻混匀，室温静置 5 min;

C 在另一无菌管中加入 50 ul 无血清培养基或 OPTI-MEM ，并添加 2ul siRNA ，用移液器轻轻混匀，室温静置 5 min;

D 将 K YY - R Transfection Reagent 培养基混合物滴加至 siRNA 培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置 15~20 min 后，立即转染。

注：siRNA 一般推荐 20uM 浓度保存, 2ul 总量是 40pmol。

3. 在每孔细胞中加入 100ul 转染复合物，轻轻摇匀。

4. 转染 6-8 小时后可更换成完全培养基。

5. 37℃培养 24-72 小时检测 mRNA 表达，48-96 小时检测蛋白表达。

5 . 转染效率低 可能 影响因素

影响因素	解决方法
细胞生长状态	建议保证细胞形态和密度是最佳的
复合比例	优化转染试剂 / RNA 的复合比例，在推荐的最佳复合比例附近，实验不同的比例，本产品在大多数细胞中的最适用量比不超过 5/1
培养时间	如使用敏感的细胞株，建议减少复合物与细胞的作用时间

6 . 产品储存

KYY-R 转染试剂可在室温下运输，到货后 4°C 可保存 1 年，本产品已滤菌，使用前轻轻摇匀。冬季寒冷，如果出现结冻的现象，要将本产品恢复至室温后使用。

7 . 注意本转染试剂不能用于人体实验。

8 .siRNA运输保存

siRNA 以冻干粉形式常温运输。收到货后，请于-20℃～-80℃保存，冻干粉可以稳定保存一年。使用前瞬时离心，用RNase-free water 或 DEPC 水配制成20μM储存液，分装保存，避免反复冻融（建议不超过 5 次）。

20 μM 储存液的配置方法